SEP SNEST DGEST
INSTITUTO
TECNOLÓGICO DE CIUDAD ALTAMIRANO
MATERIA: BIOTECNOLOGÍA
APLICADA
PRACTICA No.1
RECONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO
PROFESOR: MC. FRANCISCO
JAVIER PUCHE ACOSTA
LIC. EN BIOLOGÍA VIII SEMESTRE
PRESENTAN:
Ma. Yesenia Balandrano Alonso (08930258)
Diana Vely García Banderas (08930286)
ANEL MOJICA MACEDO (08930287)
Mayra Alejandra Nambo Pérez (08930349)
Berenice Rubí Pérez Sánchez (08930354)
Cd. Altamirano, Gro. México. 20 de Febrero del 2012
RECONOCIMIENTO
DEL MATERIAL DE LABORATORIO
Yeka_rys@hotmail.com;
diana_v_eli@hotmail.com; anel_m89@hotamail.com; may_anp1307@hotmail.com;
melisa992 @hotmail.com
La
presente práctica se realizo en el laboratorio de cultivo de tejidos del
Instituto Tecnológico de Cd. Altamirano con el objetivo de conocer las
diferentes áreas y equipos básicos de un laboratorio de cultivo de tejidos
vegetales, conocer las principales normas de comportamiento y seguridad dentro
del laboratorio, para lo ello se hizo un recorrido por el laboratorio,
describiendo donde se encontraba cada área y los materiales y equipos que hay
en cada una de ellas. El resultado de esto fue conocer como está organizado el
laboratorio de cultivo de tejidos así como las funciones de las áreas, que
reactivos se encuentran en ellas y cuál es el cuidado, manejo y mantenimiento
de las áreas. Con esto se puede concluir que al conocer todo el funcionamiento
de este laboratorio se podrán realizar las prácticas de manera adecuada y esto
hará que se tengan los resultados deseados.
Palabras clave: Laboratorio,
cultivo de tejidos vegetales, reactivos
ÍNDICE
Pág.
Antecedentes……………………………………………………………….…...…4
Definición del problema…………………………………..…………………….…5
Objetivos………………………………………………………………………..…..6
Justificación……………………………………………………………………...…7
Fundamento teórico…………………………………….…………………..…..…8
Materiales y
Métodos……………………………………..……………………....14
Resultados………………………………………………………………………....16
Conclusiones y
Recomendaciones…………………………………………......24
Fuentes consultadas…………………………………………………………...…25
Anexos………………………………………………………….………………..…26
I. ANTECEDENTES
El laboratorio
es un lugar dotado de los medios necesarios para realizar investigaciones,
experimentos, prácticas y trabajos de carácter científico, tecnológico o
técnico; está equipado con instrumentos
de medida o equipos con que se
realizan experimentos, investigaciones o prácticas diversas, según la rama de la ciencia a la que se dedique. También puede ser un aula o
dependencia de cualquier centro docente, acondicionada para el desarrollo de
clases prácticas y otros trabajos relacionados con la enseñanza.
Su importancia, sea en investigaciones o a escala industrial y en cualquiera de sus especialidades (química, dimensional, electricidad, biología, etc.), radica en el hecho de que las condiciones
ambientales están controladas y normalizadas, de modo que se puede asegurar que no se producen
influencias extrañas (a las conocidas o previstas) que alteren el resultado del
experimento o medición: control.
De igual forma garantiza que el experimento o medición es repetible, es decir,
cualquier otro laboratorio podría repetir el proceso y obtener el mismo
resultado: normalización.
La historia de los
laboratorios está influida por la historia de la medicina, ya que el hombre, al profundizar acerca de cómo
es su organismo, ha requerido el uso de laboratorios cada vez más
especializados para poder demostrar científicamente y de manera práctica como
se llevan a cabo los diferentes procesos fisiológicos de los seres vivos.
El
laboratorio requiere de áreas específicas para cada uno de los materiales y
equipos, ya que cabe mencionar que algunos de estos no estan en un espacio adecuado. Pero sobre todo
hace falta que se refuerce de materiales para contar completamente con un
laboratorio bien equipado ya que debido a ciertas razones económicas la escuela
no cuenta con el apoyo necesario para su obtención de estos. Por lo tanto es necesario buscar una solución
para que los materiales se ubiquen en áreas de acuerdo a su función,
teniendo su propio lugar
correspondiente.
III. OBJETIVOS
1.1
Objetivo
general
Conocer
las áreas del laboratorio de cultivo de tejidos
1.2
Objetivos
específicos
v Conocer las diferentes áreas y
equipos básicos de un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales.
v Conocer las principales normas
de comportamiento y seguridad dentro del laboratorio.
Esta
práctica se realizó con la finalidad de reconocer el material de laboratorio
que se utilizara en esta unidad temática, es de
gran importancia reconocer e identificar los diferentes instrumentos o herramientas de laboratorio, ya que de esta manera
seremos capaces de utilizarlos adecuadamente y también de llamarlos por su
nombre y conocer su utilidad,
también es importante mencionar que el laboratorio puede ser dividido en
diferentes áreas como son área de preparación, área lavado, siembra,
crecimiento y aclimatación, cabe mencionar que el laboratorio no está divido
por áreas y que no presentas los equipos necesarios que pueden llegar a
utilizarse.
V.
FUNDAMENTO
TEÓRICO
V.I Cultivo de tejidos vegetales
El punto de partida para el cultivo de
tejidos es la iniciación. Este es el proceso por el cual se trae material
vegetal in vivo en un medio de cultivo estéril. Requiere la disección
microscópica de la planta bajo condiciones estrictamente higiénicas con el
propósito de transferir su punto de crecimiento o tejido que crece activamente
(los tejidos meristemáticos) con seguridad y limpieza dentro de un recipiente
estéril sin introducir microorganismos contaminantes. Las células y tejidos que
crecerán y se desarrollarán desde este inicio dependerán de los objetivos del
cultivo de tejidos. En algunos casos las células conformarán una masa
aparentemente desorganizada, conocida como callo, en otros estarán presentes
otras estructuras reconocibles como tallos, órganos, raíces, bulbos u otros
órganos. El cultivo de tejidos vegetales, es una técnica de reproducción en
condiciones totalmente asépticas, en la que a partir de un pequeño segmento
inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas
genéticamente iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un
estímulo por medio de variables físicas y químicas controladas en un medio de
cultivo.
V.II Crecimiento de tejido vegetal
Estos tejidos in vitro están ahora
dentro de un microcosmos estéril de un recipiente de vidrio o de plástico; y
son protegidos del medio exterior no estéril. Es esencial mantener la
esterilidad del medio ambiente confinado en el recipiente, debido a que
cualquier microorganismo que se gane la entrada al mismo crecerá oportunamente
a una velocidad mucho más rápida que los tejidos vegetales y eventualmente
colonizarán y matarán a los tejidos; Con el propósito de sostener el vigor de
los tejidos vegetales y permitir que ellos crezcan, se multipliquen y desarrollen,
esto es cultivar los tejidos, deben darse además ciertos requerimientos
externos. Los tejidos pueden necesitar que se los apoye o sean colocados sobre
o en el interior de la superficie de un gel acuoso solidificado con agar o
ellos pueden colocarse en un medio líquido. Ellos también necesitarán de un
suministro de los elementos minerales nutritivos que son esenciales para el
crecimiento vegetal, también posiblemente algunas vitaminas, azúcares como
fuente de energía y un cocktail de hormonas vegetales que se conoce que
controlan el crecimiento y desarrollo de estos tejidos particulares. Es
conveniente preparar este medio ambiente nutricional incorporando estos
compuestos químicos dentro del gel o líquido, ajustando el pH alrededor de 6 y
esterilizando este medio de cultivo ya sea dentro del recipiente para cultivo o
en uno separado.
Para el correcto crecimiento y desarrollo del
tejido en cultivo en general es necesario el suministro de luz, pero a
intensidades muy bajas, mucho más que la de la luz solar. La acumulación en las
plantas de la energía de los carbohidratos provendrá de los azúcares agregados
al medio, más que de la fotosíntesis, de manera que son innecesarios unos altos
niveles de luz.
V.III
Áreas de laboratorio de cultivo de tejidos
El laboratorio
de cultivo de tejidos vegetales debe tener áreas para las diferentes funciones
que en él se desarrollen entre ellas están:
v
Área
de preparación.- utilizada para preparar los medios de cultivo, la cual debe
tener un espacio para poner los materiales de vidrio, plásticos y reactivos.
v
Área
de esterilización.- debe tener espacio para la autoclave la cual puede ser
pequeña o grande según el volumen del material que se procese. También debe
incluir espacio para estufas y secadores.
v
Área
de transferencia.- se realiza el trabajo de excisión, inoculación y
transferencia de los explantes a los medios de cultivo. En esta área se
demandan altos niveles de limpieza por lo que se debe tener gabinetes de flujo
laminar
v
Área
de incubación.- esta área debe contar con un buen control de la temperatura,
iluminación y humedad relativa; se instalan estantes para colocar los cultivos,
además de que esta área debe tener buena distribución de aire
v
Área
de observación.- su objetivo es realizar observaciones periódicas de los
cultivos tanto en medios semisólidos como en líquidos. En esta se encuentran los microscopios.
v
Área
de crecimiento.- las plantas generadas en el área de incubación se pueden
acondicionar y luego trasplantar en masetas estas se pueden llevar a cabo en
casas de malla o invernadero dependiendo de las condiciones donde se ubique el
laboratorio.
Ø
En
el área de preparación: refrigerador, balanzas (una macrobalanzas y una de
precisión), potenciómetro, plancha eléctrica con agitador magnético, frascos
(125, 250 y 500 ml), botellas y material de vidrio o plástico.
Ø
En
el área de lavado y esterilización: Autoclave manual o automático, destilador
de vidrio, gradillas para secado, bandejas de aluminio y de plástico de vario
tamaños, recipientes de plástico grandes, estufas para esterilización y secado.
Ø
En
el área de trasferencia: gabinete de flujo laminar, microscopio de disección
con luz incidente y instrumentos de disección: cuchillas, mangos para
cuchillas, aguja de disección, pinzas, tijeras, navaja de afeitar.
Ø
En
el área de incubación: un cuarto con temperatura, iluminación y humedad
relativa controladas; estanterías con iluminación para los cultivos, bandejas,
termómetros de máxima y mínima y gradillas para tubos de varios tamaños.
Ø
En
el área de examinación: microscopio estereoscopio, microscopio compuesto,
lentes de aumentos, y elementos óptico complementarios.
Ø
En
el área de crecimiento en vivo: macetas, suelo, bandejas, cámaras de alta
humedad.
V.V Requerimientos
para una buena técnica de cultivo de tejidos
Uno de los requisitos básico para el
éxito de la técnica de cultivo de tejidos es mantener los cultivos libres de
microorganismos contaminadores:
Los Tejidos: Puede ser
útil la inclusión de fungistáticos y bacteriostáticos en el medio de cultivo;
el sulfato de gentamicina, la penicilina y el sulfato de estreptomicina (10 a
50 mg/litro), son algunos de los productos de amplio espectro que se pueden
usar. El tratamiento de las plantas donantes del explante por medio de altas
temperaturas (35 a 40oC) también es efectivo para la obtención de segmentos de
tejido libres de bacterias y hongos sistémicos.
Los instrumentos: los
instrumentos de trabajo se deben esterilizar antes de usarlo. Lo más
aconsejable es trabajar con varios juegos de las misma herramientas y mantener
la asepsia de las que se han usado, colocando es los instrumentos en alcohol
etílico al 70% de 2 a 3 minutos, y flameándolos.
El exterior de los
recipientes de cultivo: existe la posibilidad de que, durante el tempo
trascurrido entres la esterilización de los recipientes con los medios de
cultivo y el momento de usarlo se localicen en su exterior ciertos
contaminadores, de tal manera que se mantenga estéril solo el interior de los
tubos; por lo tanto, se debe flamear obligatoriamente la boca de cada tubo
antes y después de sembrar el explante.
El investigador: El
investigador es una fuente primaria de contaminadores.
El uso de batas de laboratorio y de guantes limpios y la protección del cabello, la boca y la nariz reducen la contaminación.
Las batas limpias y las máscaras son necesarias sobe todos cuando se trabaja en un laboratorio de flujo laminar de aire. Es esencial que los investigador se limpie bien las manos y los brazos (lavándolo con jabón y agua y enjugándolo con alcohol al 70%) antes de iniciar una sección de trabajo.
El uso de batas de laboratorio y de guantes limpios y la protección del cabello, la boca y la nariz reducen la contaminación.
Las batas limpias y las máscaras son necesarias sobe todos cuando se trabaja en un laboratorio de flujo laminar de aire. Es esencial que los investigador se limpie bien las manos y los brazos (lavándolo con jabón y agua y enjugándolo con alcohol al 70%) antes de iniciar una sección de trabajo.
VI.
MATERIALES Y
MÉTODOS
Esta
práctica se llevó a cabo el día lunes 13 de febrero del año en curso a partir
de las 7: 00 a 8:00 A.M. en el laboratorio de microbiología, dicha práctica
lleva por nombre “reconocimiento del laboratorio de cultivo de tejidos”.
Antes
de realizar la práctica los materiales requeridos para llevarla a cabo fueron:
una cámara fotográfica la cual es para tomar evidencias de dicha práctica, un
lápiz con que anotar y una libreta para anotar.
Durante
esta práctica una vez contando con el material a ocupar, lo primero que se
realizo fue una pequeña definición por parte del docente de lo que es un
laboratorio, y los materiales que se deben encontrar dentro de él. Pues bien,
posteriormente estando dentro del laboratorio se mencionó que este debe contar
principalmente con mesas las cuales sirven para la preparación de los medios de
cultivo, dichas mesas se encuentran distribuidas en una área adecuada para
trabajar que estan ubicadas de la entrada hacia al frente.
Además
también cuenta con una área de transferencia y siembra, está contando
principalmente con una cámara de flujo laminar.
Una
vez observada el área de transferencia y
siembra, se hizo un pequeño recorrido en donde al lado izquierdo de las mesas
se mostró la olla de presión para la esterilización de los materiales que se
utilizan en las prácticas, materiales tales como son: cajas de Petri, matraz
Erlen Meyer, vasos de precipitados y materiales que se puedan esterilizar
mediante la olla de presión.
Dando
unos cuantos pasos más hacia al fondo nos encontramos con el área de
esterilización en donde se observó el
autoclave vertical.
Saliendo
del área de esterilización se mostró el refrigerador en el cual contiene
algunas soluciones concentradas como son las vitaminas y hormonas, mencionando
que no es el área adecuada donde está ubicado ya que esta donde se encuentra
dentro de lo que es el área de lavado.
A un
costado del refrigerador se localiza el
área de cristalería en donde pues sin duda alguna van todo material de cristal.
Mencionando algunos así como lo son los tubos de ensayo, probetas, cajas de
Petri porta objetos y cubre objetos.
Continuando
con el recorrido se mostró el área de reactivos, en donde pues más que nada
como su nombre lo dice se encuentra gran variedad de reactivos, además de eso
se encuentran también los microscopios y estereoscopios los cuales son de gran
utilidad para la observación de las muestras. Una vez estando en dicha área se
hizo un paréntesis para dialogar sobre un mueble que se encuentra ubicada en
esa área, esta conversación se hizo con el motivo de ver la forma de que ese
muebla se convierta en una vitrina para darle uso adecuado.
También
dicho laboratorio cuenta con un área de lavado y escurridores para escurrir el
material una vez que este se ha dado una limpieza.
Finamente
una vez que se terminó la observación, se discutió sobre cuál sería el lugar
apropiado para el área de incubación tomando en cuenta los factores
físico-químicos. Y Se dio fin a esta
práctica.
VII.
RESULTADOS
Los
resultados de esta práctica fueron satisfactorios ya que durante el
recorrido que se puedo observar,
reconocer e identificar, cada una de las áreas del laboratorio así como los
diversos materiales, reactivos y equipos de uso común existentes en cada una de
ellas, además se definió y describió el uso del
material. Dentro del laboratorio se reconocieron las siguientes áreas:
ÁREA DE PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVOS: se utiliza principalmente para preparas los medios de
cultivo, cuenta con mesas de trabajo para la elaboración de los mismos. Para
trabajar adecuadamente se deben mantener libres de cualquier contaminante por
lo cual antes de su uso se deben esterilizar, estas mesas tienen integrada un
área de lavado, tubos conductores de gas y agua. Cuenta con una balanza
analítica la cual nos permitirá realizar con precisión el pesado de los
reactivos a utilizar, así como con un refrigerador, este se utiliza para
guardar y mantener en buen estado los medios de cultivo.
Figura 1. Mesas de trabajo.
Figura
2. Balanza analítica.
Figura
3. Refrigerador.
ÁREA DE REACTIVOS: se
encuentran localizados en estantes, algunos se
encuentran junto al material de cristalería. Dentro de los reactivos
podemos encontrar compuestos inorgánicos como sales y compuestos orgánicos
entre los más importantes tenemos los reguladores de crecimiento ( auxinas, citocininas y giberelinas ),
vitaminas, carbohidratos y aminoácidos
los cuales son primordiales para el crecimiento de las plantas en un cultivo in
vitro. En esta área se debe tener mucho cuidado al hacer una selección de los
reactivos a utilizar en determinada práctica, ya que de caso contrario los
resultados que se obtengan no serán los deseados y se hará uso inútil de estos,
algunos de ellos o en su mayoría son muy costosos por tal razón se debe tener
total precaución a la hora de su utilización.
Figura 4. Estante de reactivos.
ÁREA DE LAVADO Y
ESTERILIZACIÓN: esta área cuenta con varios lavaderos con agua fría no se cuenta con
agua caliente, existe jabón y esponjas para el lavado de materiales, así como
con escurridores y charolas metálicas y de plástico que se utilizan para
colocar el material después del lavado. Para la esterilización se utiliza la
autoclave pequeña (olla de presión) y hay en existencia autoclaves verticales
las cuales tienen mayor capacidad para material, se cuenta con una estufa.
Figura 5. Área de lavado y escurridores de material.
Figura 6. Olla de presión y estufa.
Figura
7. Autoclave vertical.
ÁREA DE TRANSFERENCIA Y SIEMBRA: en
esta área se realiza el trabajo de excisión, inoculación y transferencia de los
explantes a los medios de cultivo, el material que se observó en esta área es
la campana de flujo laminar la cual esta diseñada para extraer
eficientemente tóxicos, nocivos y otros materiales dañinos del área de trabajo
y de esta manera evitar la contaminación a la hora de la siembra, ya que esta
actividad demanda los más altos niveles de limpieza ambiental. Antes del uso de la campana de flujo laminar
se debe desinfectar con alcohol y algodón.
Se
localizan también microscopios y estereoscopios los cuales nos ayudaran en la
función de seleccionar los mejores
explantes vegetales mediante la observación de sus características
microscópicas, para poder realizar la siembra del mejor.
Figura
8. Campana de flujo laminar.
ÁREA
DE INCUBACIÓN Y CRECIMIENTO: el área de incubación o crecimiento aún
no se encuentra totalmente estructurada ya que debido a que este laboratorio
era de usos múltiples, no existía suficiente espacio, ni el lugar con las
condiciones adecuadas para esta área.
Por lo que se optó por elegir y acondicionar un espacio donde se pudiera tener más
eficiencia en el control ambiental (temperatura, iluminación, humedad relativa
y aislamiento) para el óptimo crecimiento de los explantes en el medio cultivo.
Figura
9. Espacio a acondicionar para área de
incubación y crecimiento.
ÁREA
DE OFICINA: dentro del área de oficina se observó un
escritorio, equipo de cómputo y archivos de documentos relacionados con el las prácticas
de laboratorio.
Normatividad del laboratorio
Para el desarrollo de las prácticas es conveniente
tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda
escrupulosidad.
·
Utilizar
una bata y tenerla siempre bien abrochada, así protegerá la ropa y cuerpo de
algún derrame de sustancia peligrosas y demás accidentes.
·
Antes de realizar una práctica, debe
leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y
técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se
conozcan.
·
El orden y la limpieza deben presidir
todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada
práctica se procederá a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado.
·
Cada grupo de prácticas se
responsabilizará de su zona de trabajo y de su material.
·
Antes de utilizar un compuesto hay que
fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los
posibles riesgos de su manipulación.
·
Los productos inflamables (gases,
alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros.
Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño María,
nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener
mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.
·
Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos,
álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o
los vestidos. Nunca se verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se
dejarán resbalar suavemente por su pared.
·
Cuando se quiera diluir un ácido, nunca
se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido sobre agua.
·
Cuando
se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma
que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido
se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco.
VIII.
CONCLUSIONES
Y RECOMENDACIONES
De
acuerdo a lo encontrado en el laboratorio de usos múltiples del Instituto
Tecnológico de Cd. Altamirano se puede deducir que este no cuenta con todas las
áreas adecuadas para realizar cultivos de tejidos vegetales, esto debido a que
no se cuenta con el suficiente espacio, equipamiento y los reactivos y
sustancias existentes no se encuentran ordenadas de una forma adecuada, además
de que las condiciones en este no son controladas por ejemplo la intensidad de
la luz y la temperatura, factores que resultan muy importantes en el cultivo de
tejidos. Se pudo observar que en el área de preparación, lavado y
esterilización no hay mucho problema porque se ajusta a las necesidades,
mientras que el área de incubación aún no se encuentra definida ya que cultivos
que se han realizado se colocan solamente en áreas estratégicas para su
incubación, hecho que puede ser muy significativo en el desarrollo de algún
explante.
IX.
FUENTES
CONSULTADAS
BOTTI,
C. I. 1992. La producción de plantas in vitro. Guayaquil (Ec.), PROEXANT – AGRIDEC/ CHEMINICS.
HURTADO,
D. V.; MERINO, M. E. 1988. Cultivo de tejidos vegetales.
1 reimpresión. México, Trillas S. A. 132 p.
PIERIK, R. L. M. 1990. Cultivo in vitro de plantas superiores. Trad por Luis Ayerbe Mateo – Sagasta. Madrid, Mundi – Prensa. 326 p.
PIERIK, R. L. M. 1990. Cultivo in vitro de plantas superiores. Trad por Luis Ayerbe Mateo – Sagasta. Madrid, Mundi – Prensa. 326 p.
ROSELL C. H; VILLALOBOS, V. M. 1990. Fundamentos
teóricos prácticos del cultivo de tejidos vegetales. Roma, FAO. 112 p.
VILLALOBOS,
V. M. 1990. Fundamentos teóricos prácticos del cultivo de tejidos vegetales.
México, Colegio de Postgrado – Centro genético.
X.
ANEXOS
Debido a que en la práctica realizada se encontró con que no se cuentan con las áreas de laboratorio requeridas para el cultivo de tejidos vegetales es recomendable adquirir el siguiente material para acondicionar el área de incubación:
Fig. 1
Anaquel de 6 charolas
Anaquel
con entrepaños de 1. 00 x 40cm y 4 postes de 2. 20cm,
buen calibre, resistentes y aguantadores en color gris cuyo precio es de 370.00
en el D.F
También seria de gran utilidad la compra de láminas de acrílico
para el acondicionamiento de un estante para la incubación de cultivos.
No hay comentarios:
Publicar un comentario