UNIDAD II

2.1.2  MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

 En el campo del cultivo de tejidos, se requieren de materiales que permitan la preparación de fórmulas nutrimentales con el objetivo de cultivar tejidos, órganos y células vegetales in vitro, es por eso que el laboratorio debe contar con materiales y equipamiento de acuerdo a su función y así promover el desarrollo de la investigación.  Los materiales se clasifican de la siguiente manera:

CRISTALERÍA

En si la cristaleria de uso más común para el cultivo de tejidos se selecciona de la que se utiliza en experimentos químicos o de microbiología; Se utiliza bastante material de vidrio en la preparación de medio de cultivo y en la siembre de tejidos vegetales. El material que se seleccione deberá ser de alta calidad, esto para no tener algún fracaso especialmente con aquellos que son utilizadas en la conservación de soluciones madres.

TUBOS DE ENSAYO: Estos son tubos de vidrio y se utilizan frecuentemente en cultivos con pequeñas cantidades de soluciones o también  para diversos tipos de medios ya sean sólidos o líquidos.

MATRACES ERLENMEYER: Es un recipiente de vidrio con forma cónica, se usan para preparar medios de cultivo sólido o líquido; en la preparación de medios de cultivo.

CAJAS DE PETRI: Tienen forma circular o de tapas transparentes y son de vidrio, estas no sólo se utilizan para hacer cultivos en medios sólidos,  sino también para germinar semillas, deberán tener un ajuste firme entre la tapa y tapa. Generalmente se emplean cajas petri de vidrio, aunque en la actualidad se están fabricando de polipropileno (desechables).

BOTELLAS PARA CULTIVO: Son de gran utilidad ya que cuando se tiene el  propósito de cultivar plantas en condiciones in vitro, entonces se utilizan botellas cilíndricas o cuadradas, que pueden ser las botellas de whisky, ron, brandy, ya que son  que son resistentes a altas temperaturas y que son muy apropiadas para los medios de cultivo sólido. Generalmente tienen una tapa rosca y se les puede conservar fácilmente en una posición vertical u horizontal.

BOTELLAS PARA REACTIVOS Y SOLUCIONES MADRE: Se necesitan muchas botellas de polipropileno de 50 ml, 100 ml, 500 ml para guardar soluciones madre o para hacer soluciones de varios reactivos. Las botellas oscuras son usadas para evitar la multiplicación de hongos y bacterias u oxidación causada por la luz.

PIPETAS: permiten la transferencia de un volumen generalmente no mayor a 20 ml de un recipiente a otro de forma exacta. Suelen ser de vidrio. Está formado por un tubo transparente que termina en una de sus puntas de forma cónica, y tiene una graduación (una serie de marcas grabadas) indicando distintos volúmenes. Pipetas graduadas: de 1, 2, 5 y 10 ml.

GOTEROS: Estos consisten en un pequeño tubo de vidrio y en uno de sus extremos tiene un capuchón de hule, que permite succionar o arrojar las soluciones. Goteros con pera de goma de 10 ml.

PROBETAS: Son un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes considerables con un ligero grado de inexactitud. Sirve para contener líquidos. Probetas graduadas: de 25, 50, 100, 250, 500 y 1000 ml.

MATRACES AFORADOS: Son matraces de fondo plano y cuello estrecho muy alargado, donde tienen una marca o seña de tal modo que, cuando están llenos hasta dicha marca, se indica el volumen que contienen, se utilizan más que nada para la preparación de diversas soluciones para la elaboración de los medios básicos para el cultivo de tejidos. Con un volumen que pueden ser de 50, 100 y 250 ml.

VASIJAS DE VIDRIO PARA LA DISTRIBUCIÓN DE MEDIO DE CULTIVO

Son utilizadas principalmente para la distribución de un volumen de medio de cultivo se pueden usar diferentes formas, por ejemplo vasijas de vidrio, embudos grandes con tubos de hule y pinzas de compresión, columnas de vidrio con boca de salida o botellas de inyección de Linger o simplemente recipientes de aluminio, como jarras.

JERINGAS DISPERSORAS: Solo cuando los volúmenes son pequeños de medios de cultivo es muy efectiva la pipeta automática del tipo Cornwall. Esta pipeta está diseñada especialmente para el traspaso automático de dosis repetida de mediciones exactas y con capacidad para 10 ml.

INSTRUMENTOS Y APARATOS

Para el cultivo de tejidos hay pocos aparatos e instrumentos diseñados especialmente para este propósito. Sin embargo, se pueden escoger varios instrumentos médicos, así como también muchos aparatos de microbiología.

FILTROS Y ESTERILIZADORES: Para la esterilización del aire y líquidos se emplean filtros especiales. Uno de estos es el cilindro de diatomeas el cual es usado para líquidos y consta de una abrazadera y un matraz conectado a un extractor. El filtro más famoso es el Seitz y es usado para esterilización del aire del cuarto aséptico, el cual está conectado a una compresora de aire.

Se tienen muchos tipos de membranas de acuerdo al tamaño de los poros. Para esterilización se deben escoger aquellos que tengan poros de menor tamaño que 0.25 micras. Se les conoce bajo varios nombres como: Filtro Millipore, Filtro Galman de membrana, Filtro Toyo de membrana, etc.

Se sugiere que al utilizar estos filtros de membrana se sigan las recomendaciones indicadas por los fabricantes.

CÁMARA DE FLUJO LAMINAR: Para la realización de investigación y docencia en un laboratorio de cultivo de tejidos se requieren condiciones de asepsia, por lo que se emplea la cámara de flujo laminar que inyecta el aire ultrafiltrado y esterilizado que permita la manipulación de los tejidos sin que se presenten problemas de contaminación por microorganismos como hongos y bacterias, no solamente cuando se hace la inoculación, sino cuando se sirve medio de cultivo a frascos que, por motivos de la técnica, se tengan que esterilizar previamente. De acuerdo al flujo del aire, las cámaras son horizontal o vertical.

HORNOS PARA SECADO: Estos hornos se usan especialmente para el secado del material de vidriería lavado y para la esterilización de instrumentos usados para el cultivo. Para la esterilización por secado, la temperatura que se debe conservar es de 140°C durante 4h o bien a 150°C – 180°C por una hora, por lo que se requiere de un termostato que sea preciso.

AUTOCLAVES: Esterilizan con vapor de presión y tienen dos sistemas de calentamiento: a base de gas o de electricidad. Los modelos de autoclave son de tipo horizontal o vertical.

La esterilización de algodón, gas, papel para envoltura (aluminio, manila), matraces aforados, agua y medio de cultivo se hace en autoclave.

REFRIGERADOR Y CONGELADOR: Estos dos elementos se utilizan para la conservación de células, tejidos y soluciones madres a bajas temperaturas y para ello se requiere un refrigerador. Por otro lado, algunas de las vitaminas o compuestos de composición química indefinida, como el agua de coco, requieren de ser mantenidas en congelación, sobre todo en aquellos lugares de clima cliente. Para experimentos en pequeña escala, un refrigerador común con un pequeño congelar es suficiente.

BALANZAS: Se utiliza para la preparación del medio ya que requiere de realizar el pesaje con precisión de todos los componentes que lo integran con precisión y de acuerdo al tipo y a la cantidad del constituyente que se agregue al medio, así será el tipo de balanza que se emplee. hay dos tipos de balanza que son muy usuales en el laboratorio: granatarias y analíticas, ambas de precisión.

TORSIÓN O  GRANATARIA: Es un tipo de balanza utilizada para determinar o pesar en gramos de sustancias químicas o células cultivadas. Es muy utilizada en el laboratorio como instrumento de medición auxiliar, ya que aunque su precisión es menor que la de una balanza analítica, tiene una mayor capacidad que ésta y permite realizar las mediciones con más rapidez y sencillez.

BALANZAS ANALÍTICAS: Son un instrumento utilizado en el laboratorio, que sirve para medir la masa. Su característica más importante es que poseen muy poca incertidumbre, lo que las hace ideales para utilizarse en mediciones muy precisas. Las balanzas analíticas generalmente son digitales, y algunas pueden desplegar la información en distintos sistemas de unidades. Por ejemplo, se puede mostrar la masa de una sustancia en gramos, con una incertidumbre de 0,00001g. (0,01 mg). Sin embargo, por lo menos existen 3 tipos de aparatos:

ü  De platillo metálico, cuyo sistema de pesaje depende de material de cuarzo

ü  Electrónica con platillo fijo en el interior del equipo

ü  Electrónica con el platillo en el exterior del aparato

Estas balanzas tienen una capacidad de 100 a 160g, y una precisión de 0.1mg, lo cual es muy útil para pesar cantidades pequeñas de hormonas, vitaminas y otros microelementos.

CUIDADOS: Para lograr un pesaje adecuado sobre todo exacto, se deben observar algunas precauciones indispensables para su buen funcionamiento, como son:

Ø  Las balanzas deben estar colocadas sobre una mesa estable, dura y nivelada que impida que las vibraciones y corrientes de aire afecten las pesadas.

Ø  Deben estar ubicadas en un lugar limpio

Ø  Nunca deben estar sobrecargadas

Ø  Nunca debe pesarse directamente sobre el platillo; para tal efecto hay que emplear recipientes ligeros o papel.

Ø  Checar continuamente que la balanza esté nivelada. En el caso que no lo esté, centrar la burbuja con el nivel del aparato.

Ø  Evítese desplazarlas del lugar donde fue ubicada en el área de balanzas, de manera que no se afecte su mecanismo.

MEDIDORES DE PH: Para ajustar el pH de los medidores de cultivo se utilizan indicadores de papel y químicos, pero lo más conveniente es usar un potenciómetro con electrodos de vidrio. El potenciómetro no sólo se usa para medir el pH de los medio al prepararse, sino también para medir el pH de los medios durante el período de incubación.

DESTILADOR: El agua exenta o con una cantidad mínima de metales pesados es una condición primordial en el cultivo de tejidos vegetales. La preparación de soluciones madre, medios de cultivo, lavado de cristalería, etc., requiere de grandes cantidades de agua, por lo que es necesario tener un destilador grande de metal, tomando en cuenta que el agua obtenida  así, contiene una pequeña cantidad de iones de metales pesados, condición que afecta el desarrollo de las células en cultivo.

AGITADOR MAGNÉTICO: Consiste de una pequeña barra magnética (llamada barra de agitación) la cual esta normalmente cubierta por una capa de plástico (usualmente Teflón) y una placa debajo de la cual se tiene un magneto rotatorio o una serie de electromagnetos dispuestos en forma circular a fin de crear un campo magnético rotatorio.  

Su uso permite la mezcla de los constituyentes del medio durante la elaboración de las soluciones madre o bien en la preparación del medio definitivo. También permite mezclar el soluto con el solvente y con sistema de calentamiento, lo que facilita la disolución de algunos compuestos que requieren calor para entrar en solución. El número de revoluciones oscila entre 60 hasta 1800 rpm.